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SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
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產品名稱:

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit

NO.
008
貨號:
CSK00012
中文名稱
新冠相關試劑盒
英文名詞
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
CAS號
/
產品貨號:
CSK00012
貨期:
現貨
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2880.00
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產品信息
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產品概述(Summary)

產品名稱(Product name)

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit

貨號(Catalog#)
CSK00012
描述(description)
本試劑盒采用雙抗夾心ELISA定量分析技術,將抗RBD蛋白單克隆抗體預先包被在酶標板上,之后將標準品或分析樣本加入到微孔中,樣本中RBD蛋白會被預包被的抗體捕獲,清洗掉未結合的物質后,將生物素標記的抗RBD蛋白單克隆抗體加入到微孔中反應,形成夾心復合物,再加入HRP標記的鏈霉親和素,清洗掉未結合的抗體及酶試劑之后,將顯色底物溶液添加到微孔中顯色,顯色強度與樣品中RBD蛋白濃度成正比。

本試劑盒用于測定支氣管肺泡灌洗液、鼻咽拭子樣本中RBD蛋白的濃度。
運輸方式(Shipping)
藍冰運輸。
穩定性&儲存(Stability &Storage)
收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B 以及預包板保存于-20℃,封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存備用。

試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。
使用方法(Standard Operating Procedure)

所需設備及試劑

450 nm濾光片酶標儀,含540 nm570nm校正波長更佳

單道或多道微量移液器,移液器槍頭

去離子水

• 500 mL量筒

樣品稀釋管或不同規格EP

吸水紙

 

 一、試劑準備

使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。

20×濃縮清洗液: 如果濃縮液中有晶體析出,加熱至室溫并輕輕混合,直到晶體完全溶解,25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL,得到清洗工作液。

 

 

標準品:用1mL樣本稀釋液溶解RBD蛋白標準品凍干粉,溶解后標準品母液濃度為8000pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘,然后進行標準品的稀釋,將標準品母液使用樣本稀釋液10倍稀釋得到第一個標準點800pg/mL,依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標準點800 pg/mL、 400 pg/mL、200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、最后再以100ul樣本稀釋液為零標準(0 pg/mL),共計8個標準點,建議每個標準點至少做2個平行孔。

檢測溶液A(生物素標記):震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

檢測溶液BHRP標記):震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

顯色液: 避光保存,顯色時100μL /孔。 

終止液:顯色完畢后50μL /孔。

 

 二、實驗步驟

使用前將所有試劑和樣本置于室溫,建議對所有標準品和樣本進行一式兩份的分析

1按照前面章節的指示準備所有試劑和準備工作。 

2. 從板架上取下多余的微孔板條,將其放回裝有干燥劑包的箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。

3每孔加入100μL 稀釋好的標準品(共計8點)和待測樣本,用封板膜封住,37℃孵育60分鐘。

4棄去孔內液體,每孔加入 300μL的清洗工作液,輕微震蕩后棄去孔內液體,將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍,使殘留在孔內的液體全部去除,重復洗板3次,此過程也可采用尖嘴噴射瓶,多道移液器或自動洗板機來完成。

5每孔加入100μL檢測溶液A工作液(生物素標記),用新的封板膜封住,37℃孵育60分鐘。

6重復步驟4中的洗板程序。

7. 每孔加入100μL檢測溶液B工作液HRP標記),用新的封板膜封住,37℃孵育30分鐘。

8. 重復步驟4中的洗板程序。

9每孔加入100μL顯色液,室溫避光顯色10分鐘。

10每孔加入50μL終止液,孔里的顏色應該由藍色變至黃色,如果孔內顏色為綠色或顏色變化不均勻,輕輕震動酶標板板使顏色均一。

11擦干酶標板底部水氣,立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度值(O.D.值),如果波長校正可用,則設置為540 nm570 nm,如果波長校正不可用,則從450 nm的讀數中減去540 nm570 nm的讀數,這種修正可去除酶標板讀數中的光學偏差,如果沒有校正波長,可直接讀取450 nm的讀數,但讀值有可能會更高、更不準確。

 

 三、標準曲線制作 

取每個標準和樣本的復孔平均值O.D.,減去零標準孔平均值O.D.后,以陽性對照的濃度為橫坐標,O.D.值為縱坐標,繪出標準曲線(R2值越趨近于1曲線越精確),然后再將樣本的平均值O.D.帶入標準曲線的回歸方程式,計算出樣本中目標蛋白濃度。

如果樣本已經稀釋,從標準曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數,即為樣本中目標蛋白的實際濃度。

 

四、標曲案例

標準曲線僅用于演示,每次實驗均需生成單獨的標準曲線。

 

 

 五、檢測范圍

12.5pg/mL800pg/mL

 

 六、最低檢測限(MDD)

10pg/mL

MDD是測試20個零標準(稀釋液)的平均O.D.值上加兩倍標準差后計算相應的濃度來確定的。

 

七、精密度

批內差: CV<12%

批間差: CV<15%

 

八、穩定性

試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。

 

 九、實驗細節說明

1. 在試劑盒標簽上的有效期內使用,不要與其他廠家的試劑盒混合使用。

2. 如果樣本檢測值超出標準曲線范圍,可適當調整稀釋倍數并重新測定,或預估樣本中蛋白濃度,在實驗之前預先稀釋數個梯度同時進行測定。

3. 為避免交叉污染,不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭,每管試劑使用單獨的容器儲存。

4. 在孵育過程中貼緊封板膜。

5. 顯色液避光保存,臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。

6. 濃縮清洗液(20×)需使用去離子水120稀釋至工作濃度,去離子水不包含在試劑盒中,需實驗人員自備。

7. 終止液為酸性溶液,具有輕微腐蝕性,使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接觸,使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應,如情節嚴重請及時就醫。

8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用,已開封的試劑盒建議在1個月內使用,未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存,收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B、以及預包板保存于-20℃,其余試劑請置于 ℃保存備用。

 

十、常見問題解決指南

問題

原因

解決方案

標準曲線差

移液不精確

檢查和校正移液器

標準品準備不正確

進行正確的標準品梯度稀釋

 

O.D 值低

孵育時間太短

保證充足的孵育時間

溫度不正確

試劑平衡至室溫并保證孵育溫度正確

試劑體積不正確

檢查移液器并確保加樣體積與說明書一致

 

精密度低

移液不精確

檢查和校正移液器

混勻不充分

充分混勻和吸取試劑

洗滌不充分

按說明書要求充分洗滌和浸泡

背景值高

洗滌不充分

按說明書要求充分洗滌和浸泡

清洗液污染

重新配置清洗液

靈敏度低

試劑盒儲存不當

試劑盒短期整體保存于4℃,長期保存根據說明書分開保存各組分

組分和說明(Component and Instruction)

樣品清單及儲存條件

 

樣品名稱

規格

描述

推薦儲存條件

預包板

96孔聚苯乙烯微孔板(12*8孔),預包被RBD特異性單克隆抗體。

密封狀態放置于-20℃保存。

標準品

8ng重組RBD蛋白凍干粉(含防腐劑),臨用前復溶于1mL樣本稀釋液。

放置于-20℃保存。

檢測溶液A

 

12μL Biotin標記的抗RBD單克隆抗體(含防腐劑),臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

放置于-20℃保存。

檢測溶液B

 

12μL HRP標記的鏈酶親和素(含防腐劑),臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

放置于-20℃保存。

樣本稀釋液

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于標準品、待測樣本的稀釋。

放置于4℃保存。

檢測溶液稀釋液

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于檢測溶液A和檢測溶液B的稀釋。

放置于4℃保存。

濃縮清洗液

25 mL 20×)濃縮清洗液(含防腐劑),臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。

放置于4℃保存。

顯色液

12 mL TMB(四甲基聯苯胺)。

放置于4℃保存。

終止液

6 mL 2M 酸液。

放置于4℃保存。

封板膜

用于實驗中封閉酶標板。

放置于常溫保存。

 

*在試劑盒保質期內使用

Note

For research use only .

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加
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