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產品名稱：
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K)
NO.
004
貨號：
CSK00020
中文名稱
新冠相關試劑盒
英文名詞
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K)
CAS號
/
產品貨號：
CSK00020
貨期：
現貨
價格與訂購：
2880.00
數量：
-
+
庫存：
100
產品信息
如何訂購
產品概述（Summary）
產品名稱（Product name）
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K)
貨號（Catalog#）
ATK00020
描述（description）
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K)基于中和抗體ELISA檢測的原理，可以檢測血清或血漿中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗體濃度，這種抗體可以阻斷RBD(E484K)和ACE2之間的相互作用，該試劑盒包含兩個關鍵成分：HRP標記的重組人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(E484K)蛋白。
本試劑盒用于測定血清或血漿樣本 RBD(E484K)中和抗體的濃度。
本試劑盒用于測定血清或血漿樣本 RBD(E484K)中和抗體的濃度。
運輸方式（Shipping）
藍冰運輸。
穩定性&儲存（Stability &Storage）
收到試劑盒后請將陽性對照、陰性對照、檢測溶液 A 以及預包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存備用。
試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
使用方法（Standard Operating Procedure）
所需設備及試劑
450 nm濾光片酶標儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
單道或多道微量移液器，移液器槍頭
去離子水
500 mL量筒
樣品稀釋管或不同規格EP管
吸水紙
一、樣品收集與儲存
處理所有的血液和血清，請按照NCCLS提供的處理和儲存血清和血漿樣本的建議（1990年H18-A批準的血液樣本處理和處理標準程序）。
血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內1000 x g離心
15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
二、試劑準備
使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
20×濃縮清洗液：如果濃縮清洗液中有晶體析出，平衡至室溫并搖勻，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗液。
待測樣本：將待測樣本用樣本稀釋液按照體積比1:9稀釋，例如10μL樣本加入90μL樣本稀釋液。
陽性對照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
陰性對照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:10稀釋至工作濃度。
檢測溶液A（HRP標記）：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
顯色液：避光保存，顯色時100μL /孔。室溫下孵育8?10分鐘。
終止液：顯色完畢后50μL /孔。
三、實驗步驟
使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對所有標準品、對照品和樣本進行一式兩份的分析。
1. 按照前面章節的指示準備所有試劑和樣本。
2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 將稀釋的陽性對照、陰性對照和待測樣本分別與檢測溶液A按照 1:1等體積混合。例如，將100μL陽性對照與100μL檢測溶液A混合，該步驟可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中進行。
4. 將陽性對照混合物、陰性對照混合物和待測樣本混合物各100µL添加到對應的酶標板孔中，用封板膜蓋好，37℃孵育1小時。
5. 棄去孔內液體，每孔加入 300μL的清洗液，輕微震蕩后棄去孔內液體，將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內的液體全部去除，重復洗板 5 次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動洗板機來完成。
6. 每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色8-10分鐘。
7. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應該由藍色變至黃色，如果孔內顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動酶標板使顏色均一。
8. 擦干酶標板底部水氣，立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的O.D.值，如果波長校正可用，則設置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數中減去540 nm或570 nm的讀數，這種修正可去除酶標板讀數中的光學偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm的讀數，但讀值有可能不準確。
四、結果判讀
為確保結果的有效性，每次檢測必須包括陽性和陰性對照，陽性對照和陰性對照檢測OD450必須在下表所列的范圍內，如果OD450值不符合下表要求，則試驗無效，必須重復進行。
|
項目 |
OD450值 |
結果判斷 |
|
陽性對照 |
＜ 0.3 |
通過 |
|
陰性對照 |
＞0.9 |
通過 |
用抑制率來判定樣本中抗SARS-CoV-2中和抗體的水平，判定公式如下：
五、判定閾值
|
項目 |
閾值 |
結果 |
檢測結果判讀 |
|
中和抗體檢測 |
≥20% |
陽性 |
檢測到中和抗體 |
|
＜20% |
陰性 |
未檢測到中和抗體 |
六、精密度
批內差：CV<8%
批間差：CV<10%
七、穩定性
試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
八、實驗細節說明
1. 在試劑盒標簽上的有效期內使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
2. 如果陰性對照或陽性對照檢測OD值超出檢測范圍，可適當縮短顯色時間。
3. 為避免交叉污染，不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。
4. 在孵育過程中貼緊封板膜。
5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出室溫平衡。
6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。
7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應，如情節嚴重請及時就醫。
8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內使用，未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存，收到試劑盒后請將陰性對照、陽性對照、檢測溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余試劑請置于 4 ℃保存備用。
九、常見問題解決指南
| 問題 |
可能原因 |
解決方案 |
|
|
陽性質控讀數低或者異常 |
檢測溶液A和預包板失活 |
a. |
增加反應時間或檢測試劑濃度以補償可能喪失的活性 |
|
儀器設置錯誤 |
a. a.
|
檢查儀器設置 |
|
|
b. |
提前一小時預熱酶標儀 |
||
|
加樣錯誤 |
a. |
檢查加樣步驟 |
|
|
試劑過早提前準備 |
a. |
確保工作液現配現用 |
|
|
溫度不穩定
|
a. |
孵育時間和溫度參見說明書，避免反復凍融
|
|
|
讀數背景高 |
樣品中含有抑制劑
|
a. |
加入空白孔 |
|
b. |
保證DMSO < 1% |
||
|
洗滌不完全 |
a. |
增加洗滌次數和洗液量 |
|
|
緩沖液樣品污染、降解
|
a. |
確保正確準備，使用和存儲了緩沖液和樣品
|
|
|
讀數不穩定 |
移液或稀釋方法不一致 |
a. |
校正移液器
|
|
b.
|
準備預混液以減少移液不一致 |
||
|
c. |
設置平行孔以獲得更準確的結果 |
||
|
孔中有氣泡 |
a. |
輕震酶標板以去除氣泡
|
|
|
讀數過高 |
a. |
調整樣品濃度以達到最佳信號強度。
|
|
|
b. |
孵育時間調整至45分鐘
|
||
|
試劑和樣品混合不充分 |
a. |
確保試劑與樣品完全混合
|
|
|
顯色不完全 |
緩沖液殘留或污染
|
a. |
陰性對照中的顏色應在添加TMB底物后10秒鐘內出現。 如未按上述時間顯色可考慮以下情況： a.在添加TMB之前確保沒有污染或殘留的緩沖液 b.延長TMB孵育時間到15分鐘 |
組分和說明（Component and Instruction）
|
樣品名稱 |
規格 |
描述 |
推薦儲存條件 |
|
預包板 |
1 板 |
96孔聚苯乙烯微孔板（12列*8孔），預包被RBD(E484K)蛋白。 |
密封狀態放置于-20℃保存。 |
|
陽性對照 |
1 管 |
12μL /管陽性對照，臨用前用樣本稀釋液1:100 稀釋至工作濃度。 |
放置于-20℃保存。 |
|
陰性對照 |
1 管 |
60μL /管陰性對照，臨用前用樣本稀釋液1:10 稀釋至工作濃度。 |
放置于-20℃保存。 |
|
檢測溶液A
|
1 管 |
12μL/管-HRP標記 ACE2 蛋白（含防腐劑），臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。 |
放置于-20℃保存。 |
|
樣本稀釋液 |
1 瓶 |
25 mL稀釋液（含防腐劑），用于待測樣本的稀釋。 |
放置于4℃保存。 |
|
檢測溶液稀釋液 |
1 瓶 |
25 mL稀釋液（含防腐劑），用于檢測溶液A的稀釋。 |
放置于4℃保存。 |
|
濃縮清洗液 |
1 瓶 |
25 mL （20×）濃縮清洗液（含防腐劑），臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。 |
放置于4℃保存。 |
|
顯色液 |
1 瓶 |
12 mL TMB（四甲基聯苯胺）。 |
放置于4℃保存。 |
|
終止液 |
1 瓶 |
6 mL 。 |
放置于4℃保存。 |
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封板膜 |
3 片 |
用于實驗中封閉酶標板。 |
放置于常溫保存。 |
Note
For research use only .
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SARS-CoV-2(2019-nCoV) Surrogate Virus Neutralization定量試劑盒
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