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SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)
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產品名稱:

SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)

NO.
001
貨號:
CSK00017
中文名稱
新冠相關試劑盒
英文名詞
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)
CAS號
/
產品貨號:
CSK00017
貨期:
現貨
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2880.00
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-
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產品信息
如何訂購

產品概述(Summary)

產品名稱(Product name)

SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit (N501Y)

貨號(Catalog#)
ATK00017
描述(description)
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(N501Y)基于中和抗體ELISA檢測的原理,可以檢測血清或血漿中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗體濃度,這種抗體可以阻斷RBD(N501Y)和ACE2之間的相互作用,該試劑盒包含兩個關鍵成分:HRP標記的重組人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(N501Y)蛋白。

本試劑盒用于測定血清或血漿樣本 RBD(N501Y)中和抗體的濃度。
運輸方式(Shipping)
藍冰運輸。
穩定性&儲存(Stability &Storage)
收到試劑盒后請將陽性對照、陰性對照、檢測溶液 A 以及預包板保存于-20℃,封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存備用。

試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。
使用方法(Standard Operating Procedure)

所需設備及試劑

450 nm濾光片酶標儀,含540 nm或570nm校正波長更佳

單道或多道微量移液器,移液器槍頭

去離子水

500 mL量筒

樣品稀釋管或不同規格EP管

吸水紙

 

一、樣品收集與儲存

處理所有的血液和血清,請按照NCCLS提供的處理和儲存血清和血漿樣本的建議(1990年

H18-A批準的血液樣本處理和處理標準程序)。

血清樣本:全血室溫放置60分鐘或4℃過夜,然后1000 x g離心15分鐘,取上清檢測,或分

裝后于≤-20℃冰箱保存,避免樣品反復凍融。

血漿:使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿,樣品采集后30分鐘內1000 x g離心15分鐘,取上清檢測,或分裝后于≤-20℃冰箱保存,避免樣品反復凍融。

 

二、試劑準備

使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。

20×濃縮清洗液:如果濃縮清洗液中有晶體析出,平衡至室溫并搖勻,直到晶體完全溶解,25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL,得到清洗液。

待測樣本:將待測樣本用樣本稀釋液按照體積比1:9稀釋,例如10μL樣本加入90μL樣本稀釋液。

陽性對照:臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,使用樣本稀釋液1:100稀釋至工作濃度。

陰性對照:臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,使用樣本稀釋液1:10稀釋至工作濃度。

檢測溶液A(HRP標記):臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,使用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

顯色液:避光保存,顯色時100μL /孔。室溫下孵育8?10分鐘。

終止液:顯色完畢后50μL /孔。

 

三、實驗步驟

使用前將所有試劑和樣本置于室溫,建議對所有標準品、對照品和樣本進行一式兩份的分析。

1. 按照前面章節的指示準備所有試劑和樣本。

2. 從板架上取下多余的微孔板條,將其放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。

3. 將稀釋的陽性對照、陰性對照和待測樣本分別與檢測溶液A按照 1:1等體積混合。例如,將100μL陽性對照與100μL檢測溶液A混合,該步驟可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中進行。

4. 將陽性對照混合物、陰性對照混合物和待測樣本混合物各100µL添加到對應的酶標板孔中,用封板膜蓋好,37℃孵育1小時。

5. 棄去孔內液體,每孔加入 300μL的清洗液,輕微震蕩后棄去孔內液體,將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍,使殘留在孔內的液體全部去除,重復洗板 5 次,此過程也可采用尖嘴噴射瓶,多道移液器或自動洗板機來完成。

6. 每孔加入100μL顯色液,37℃避光顯色8-10分鐘。

7. 每孔加入50μL終止液,孔里的顏色應該由藍色變至黃色,如果孔內顏色為綠色或顏色變化不均勻,輕輕震動酶標板使顏色均一。

8. 擦干酶標板底部水氣,立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的O.D.值,如果波長校正可用,則設置為540 nm或570 nm,如果波長校正不可用,則從450 nm的讀數中減去540 nm或570 nm的讀數,這種修正可去除酶標板讀數中的光學偏差,如果沒有校正波長,可直接讀取450 nm的讀數,但讀值有可能不準確。

 

四、結果判讀

為確保結果的有效性,每次檢測必須包括陽性和陰性對照,陽性對照和陰性對照檢測OD450必須在下表所列的范圍內,如果OD450值不符合下表要求,則試驗無效,必須重復進行。

項目

OD450

結果判斷

陽性對照

 0.3

通過

陰性對照

0.9

通過

用抑制率來判定樣本中抗SARS-CoV-2中和抗體的水平,判定公式如下:

 

五、判定閾值

項目

閾值

結果

檢測結果判讀

       中和抗體檢測

20%

陽性

檢測到中和抗體

20%

陰性

未檢測到中和抗體

六、精密度

批內差:CV<8%

批間差:CV<10%

 

七、穩定性

試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。

 

八、實驗細節說明

1. 在試劑盒標簽上的有效期內使用,不要與其他廠家的試劑盒混合使用。

2. 如果陰性對照或陽性對照檢測OD值超出檢測范圍,可適當縮短顯色時間。

3. 為避免交叉污染,不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭,每管試劑使用單獨的容器儲存。

4. 在孵育過程中貼緊封板膜。

5. 顯色液避光保存,臨用前15分鐘從冰箱取出室溫平衡。

6. 濃縮清洗液(20×)需使用去離子水1:20稀釋至工作濃度,去離子水不包含在試劑盒中,需實驗人員自備。

7. 終止液為酸性溶液,具有輕微腐蝕性,使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接觸,使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應,如情節嚴重請及時就醫。

8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用,已開封的試劑盒建議在1個月內使用,未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存,收到試劑盒后請將陰性對照、陽性對照、檢測溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃,其余試劑請置于 4 ℃保存備用。

 

九、常見問題解決指南

問題

可能原因

解決方案

陽性質控讀數低或者異常

檢測溶液A和預包板失活

a.

增加反應時間或檢測試劑濃度以補償可能喪失的活性

儀器設置錯誤

a.

a.

 

檢查儀器設置

b.

提前一小時預熱酶標儀

加樣錯誤

a.

檢查加樣步驟

試劑過早提前準備

a.

確保工作液現配現用

溫度不穩定

 

a.

孵育時間和溫度參見說明書,避免反復凍融

 

讀數背景高

樣品中含有抑制劑

 

a.

加入空白孔

b.

保證DMSO < 1%

洗滌不完全

a.

增加洗滌次數和洗液量

緩沖液樣品污染、降解

 

a.

確保正確準備,使用和存儲了緩沖液和樣品

 

讀數不穩定

移液或稀釋方法不一致

a.

校正移液器

 

b.

 

準備預混液以減少移液不一致

c.

設置平行孔以獲得更準確的結果

孔中有氣泡

a.

輕震酶標板以去除氣泡

 

讀數過高

a.

調整樣品濃度以達到最佳信號強度。

 

b.

孵育時間調整至45分鐘

 

試劑和樣品混合不充分

a.

確保試劑與樣品完全混合

 

顯色不完全

緩沖液殘留或污染

 

a.

陰性對照中的顏色應在添加TMB底物后10秒鐘內出現。

如未按上述時間顯色可考慮以下情況:

a.在添加TMB之前確保沒有污染或殘留的緩沖液

b.延長TMB孵育時間到15分鐘

組分和說明(Component and Instruction)

樣品名稱

規格

描述

推薦儲存條件

預包板

96孔聚苯乙烯微孔板(12*8孔),預包被RBD(N501Y)蛋白。

密封狀態放置于-20℃保存。

陽性對照

12μL /管陽性對照,臨用前用樣本稀釋液1:100 稀釋至工作濃度。

放置于-20℃保存。

陰性對照

60μL /管陰性對照,臨用前用樣本稀釋液1:10 稀釋至工作濃度。

放置于-20℃保存。

檢測溶液A

 

12μL/-HRP標記 ACE2 蛋白(含防腐劑),臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

放置于-20℃保存。

樣本稀釋液

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于待測樣本的稀釋。

放置于4℃保存。

檢測溶液稀釋液

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于檢測溶液A的稀釋。

放置于4℃保存。

濃縮清洗液

25 mL 20×)濃縮清洗液(含防腐劑),臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。

放置于4℃保存。

顯色液

12 mL TMB(四甲基聯苯胺)。

放置于4℃保存。

終止液

6 mL 。

放置于4℃保存。

封板膜

用于實驗中封閉酶標板。

放置于常溫保存。

Note

For research use only .

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加
暫未實現,敬請期待
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