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產品名稱:

PNGase F

NO.
018
貨號:
CSE00005
中文名稱
/
英文名詞
PNGase F
CAS號
/
產品貨號:
CSE00005
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現貨
價格與訂購:
729.00
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產品信息
如何訂購
概述(Summary)icon
產品英文名(Product Name)
PNGase F
產品中文名
肽N-糖苷酶
產品描述(Description)
肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一種酰胺水解酶,主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖,及雜合和復雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點為糖蛋白內側N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵,同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。
PNGase F 不會去除常見植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。
儲存條件(Storage)
儲存于 -20°C,保質期 12 個月。
運輸方式(Shipping)
藍冰運輸
Note
For research use only .
狀態(Form)
Liquid
儲存溶液(Buffer)
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol
表達宿主(Host)
E. coli
酶切位點
PNGase F幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-連接糖 (x = H 或寡糖) 。
分子量
36kDa
純度
>95% as determined by SDS-PAGE
比活性
1,800,000 U/mg
酶活單位定義
1個酶活力單位指在10ul的反應體系中,37℃條件下1小時從10ug變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量定義為一個活性單位(U)。
酶切反應條件
37℃ ,酶切反應1h,每1ug酶可以酶切10ug底物。
實驗示例(Experiment Example)icon
使用方法(Standard Operating Procedure)icon
1. 在變性條件下進行SDS-PAGE的蛋白質去糖基化
(1) 在水中加入50μg目標糖蛋白(或低離子強度的相容緩沖液)至最終體積為12μl。
(2) 加入1μl 的5%SDS。
(3) 加入1μl的 1MDTT。
(4) 在95℃加熱5min使樣品變性。
(5) 在室溫下冷卻5min。
(6) 加入2μl的0.5M磷酸鈉緩沖液(pH 7.5)。如果pH在PNGase F(pH 6-10)范圍內,可以使用其他緩沖液。   
(7) 加入2μl的10%NP-40??捎肨riton X-100替代NP-40。
(8) 加入2μl的PNGase F.
(9) 在37°C孵育1-3h。
注意:糖蛋白的去糖基化可以通過SDS-PAGE上的凝膠移位來觀察,去糖基化的產物比糖基化的底物移動的更快。
 
2.  在非變性條件下進行質譜檢測的蛋白質去糖基化
(1) 在50mM碳酸氫銨(pH 7.8)中加入20μg的糖蛋白至終體積為18μl。
(2) 加入2μl的PNGase F.
(3) 在37°C孵育2-18h。
注意:在變性條件下大多數底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGase F的量和延長孵育時間。
產品實驗圖片icon
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