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產品名稱:

Human IL-6 ELISA Kit

NO.
011
貨號:
CSK00014
中文名稱
人 IL-6 ELISA 試劑盒
英文名詞
Human IL-6 ELISA Kit
CAS號
/
產品貨號:
CSK00014
貨期:
現貨
價格與訂購:
2800.00
數量
-
+
庫存:
100
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產品信息
如何訂購
概述(Summary)

產品英文名(Product Name)

Human IL-6 ELISA Kit

產品描述(Description)

本試劑盒采用定量雙抗夾心ELISA分析技術,將抗人IL-6單克隆抗體預先包被在酶標板上,之后將標準品和分析樣品加入到微孔中,樣品中IL-6抗原會被預包被的抗體捕獲,清洗掉未結合的物質后,將生物素標記的抗人IL-6單克隆抗體加入到微孔中反應,形成夾心復合物,再加入HRP酶標記的親和素,清洗掉未結合的抗體及酶試劑之后,將顯色底物溶液添加到微孔中顯色,顯色強度與樣品中IL-6濃度成正比。
本試劑盒用于測定細胞培養上清液、血清和血漿中人白細胞介素6(IL-6)的濃度。

儲存條件(Storage)

收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B 以及預包板保存于-20℃,封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存備用。 試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。

運輸方式(Shipping)

藍冰運輸。

Note

For research use only

使用方法(Standard Operating Procedure)
所需設備及試劑
• 450 nm濾光片酶標儀,含540 nm或570nm校正波長更佳
•單道或多道微量移液器,移液器槍頭
•去離子水
• 500 mL量筒
•樣品稀釋管或不同規格EP管
•吸水紙
一、樣品收集和儲存
1.細胞培養上清液:1000x g離心15分鐘,取上清檢測,或分裝后于≤-20℃冰箱保存,避免樣品反復
凍融。
2.血清樣本:全血室溫放置60分鐘或4℃過夜,然后1000 x g離心15分鐘,取上清檢測,或分裝后
于≤-20℃冰箱保存,避免樣品反復凍融。

3.血漿:使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿,樣品采集后30分鐘內1000 x g離心15分
鐘,取上清檢測,或分裝后于≤-20℃冰箱保存,避免樣品反復凍融。

二、試劑準備
使用前將所有試劑和標本置于室溫平衡。
1.濃縮清洗液: 如果濃縮液中有晶體析出,加熱至室溫并輕輕混合,直到晶體完全溶解,25mL濃縮清洗液使用離子水定容至500mL,得到清洗工作液。
2.用0.5ml標準品稀釋液溶解IL-6標準品凍干粉,溶解后標準品母液濃度為1600pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘,用移液槍取100μL 標準品母液至EP管中, 再取700μL標準品稀釋液至EP管中,得到第一個標準點200pg/mL,依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標準點200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、6.25pg/mL、3.125pg/mL最后再以100ul標準品稀釋液為零標準(0 pg/mL),共計8個標準點,建議每個標準點至少做2個平行孔。
3.檢測溶液A(生物素標記),使用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
4.檢測溶液B(HRP標記),使用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心,使液體集中于管底,臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
5.顯色液: 避光保存,顯色時100μL /孔。
6.終止液:顯色完畢后50μL /孔。

三、使用前將所有試劑和樣品置于室溫。建議對所有標準品、對照品和樣品進行一式兩份的分析。
1.按照前面章節的指示準備所有試劑和準備工作。
2.從板架上取下多余的微孔板條,將其放回裝有干燥劑包的箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。
3.每孔加入100μL標準品或樣品,用封板膜封住,37℃孵育60分鐘。
4.棄去孔內液體,每孔加入 300μL的清洗液清洗,輕微震蕩后棄去孔內液體,將酶標板倒扣在吸水紙
上輕拍,使殘留在孔內的液體全部去除,重復洗板 3 次,此過程也可采用尖嘴噴射瓶,多道移液器
或自動洗板機來完成。
5.每孔加入100μL檢測溶液A(生物素標記),用新的封板膜封住,37℃孵育30分鐘。
6.重復步驟4中的洗板程序。
7.每孔加入100μL檢測溶液B(HRP標記),用新的封板膜封住。37℃孵育30分鐘。
8.重復步驟4中的洗板程序。
9.每孔加入100μL顯色液,37℃避光顯色10分鐘。
10.每孔加入50μL終止液,孔里的顏色應該由藍色變至黃色,如果孔內顏色為綠色或顏色變化不均勻,
輕輕震動酶標板板使顏色均一。
11.擦干酶標板底部水氣,立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度值(O.D.值),如果波長
校正可用,則設置為540 nm或570 nm,如果波長校正不可用,則從450 nm的讀數中減去540 nm或
570 nm的讀數,這種修正可去除酶標板讀數中的光學偏差,如果沒有校正波長,可直接讀取450 nm
的讀數,但讀值有可能會更高、更不準確。

四、標準曲線制作
每個標準品和樣品的復孔平均值O.D.,減去零標準孔平均值O.D.后,以標準品的濃度為縱坐標,O.D.值為橫坐標,繪出標準曲線(R2值越趨近于1曲線越精確),然后再將樣品的平均值O.D.帶入標準曲線的回歸方程式,計算出樣品濃度。
如果樣品已經稀釋,從標準曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數,即為樣品的實際濃度。

五、標曲案例
標準曲線僅用于演示, 每次實驗均需生成單獨的標準曲線。

六、檢測范圍
3.125pg/mL—200pg/mL

七、最低檢測限(MDD)
0.5pg/mL
MDD是測試20個零標準(稀釋液)的平均O.D.值上加兩倍標準差后計算相應的濃度來確定的。

八、精密度
批內差: CV<12%
批間差: CV<15%

九、穩定性
試劑盒按推薦溫度保存6個月,信號強度降低小于 10%。

十、回收率
分別于培養基,血清和血漿樣本中加入低,中,高濃度的 IL6標準品,測定值與理論值的比率即為回收率。

十一、線性
分別于培養基,血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標準品,使用稀釋液倍比稀釋成 1:2,1:4,1:8,1:16 的待測樣本,稀釋后樣本中 IL6 含量的測定值與理論值的比率即為線性范圍。

十二、實驗細節說明
1.在試劑盒標簽上的有效期內使用,不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
2.如果樣品檢測值超出標準曲線范圍,可使用適當的稀釋液稀釋樣品并重新測定,或預估樣品中IL6濃度,在實驗之前預先稀釋數個梯度同時進行測定。
3.為避免交叉污染,不同標準品、樣品、試劑的加樣需更換移液槍頭,每管試劑使用單獨的容器儲存。
4.在孵育過程中貼緊封板膜。
5.顯色液避光保存,臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
6.濃縮清洗液(20×)需使用去離子水1:20稀釋至工作濃度,去離子水不包含在試劑盒中,需實驗人員自備。
7.終止液為酸性溶液,具有輕微腐蝕性,使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接觸,使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應,如情節嚴重請及時就醫。
8.試劑盒酶標板條可按需拆卸使用,已開封的試劑盒建議在1個月內使用,未開封的試劑盒以包裝盒上保質期為準。

 

回收率

分別于培養基,血清和血漿樣本中加入低,中,高濃度的 IL6標準品,測定值與理論值的比率即為回收率。

樣本類型

平均回收率(%

回收率范圍(%

血清(n=5

92

85-98

EDTA 血漿 (n=5)

93

82-101

肝素 血漿(n=5)

88

87-97

培養基(n=5)

94

92-101

線性

分別于培養基,血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標準品,使用稀釋液倍比稀釋成 1:2,1:4,1:8,1:16 的待測樣本,稀釋后樣本中 IL6 含量的測定值與理論值的比率即為線性范圍。

樣本類型

1:2

1:4

1:8

1:16

血清(n=5

92-101%

91-105%

89-107%

88-110%

EDTA 血漿 (n=5)

93-103%

92-111%

83-112%

88-110%

肝素 血漿(n=5)

95-108%

94-112%

91-111%

95-109%

培養基(n=5)

94-105%

93-111%

89-105%

85-112%

組分&說明(Component & Instruction)

樣品名稱

規格

描述

推薦儲存條件

IL6抗體預包板

1

96孔聚苯乙烯微孔板(12*8孔),預包被抗人IL-6特異性單克隆抗體。

密封狀態放置于-20℃保存。

IL6標準品

1

800pg重組人IL-6凍干粉(含防腐劑),使用前復溶于0.5mL標準品稀釋液,終濃度為1600pg/mL。

放置于-20℃ 保存。

檢測溶液A

 

1

120μL Biotin標記IL-6單克隆抗體(含防腐劑),臨用前用抗體稀釋液1:100稀釋至工作濃度。

放置于-20℃ 保存。

檢測溶液B

 

1

12μL HRP標記的鏈酶親和素(含防腐劑),臨用前用抗體稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

放置于-20℃ 保存。

標準品稀釋液

1

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于標準品、上清、血清、血漿的稀釋。

放置于4℃ 保存。

檢測溶液稀釋液

1

25 mL稀釋液(含防腐劑),用于檢測溶液A和檢測溶液B的稀釋。

放置于4℃ 保存。

濃縮清洗液

1

25 mL 20×)濃度的清洗液(含防腐劑),臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。

放置于4℃ 保存。

顯色液

12 mL TMB(四甲基聯苯胺)。

放置于4℃ 保存。

終止液

6 mL 2M 酸液。

放置于4℃ 保存。

封板膜

用于實驗中封閉酶標板。

放置于常溫保存。

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