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武漢科斯坦生物科技有限公司
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Mycoplasma PCR Test Kit
概述(Summary)icon
產品英文名(Product Name)
Mycoplasma PCR Test Kit
產品中文名
支原體PCR檢測試劑盒
產品描述(Description)
支原體PCR檢測試劑盒是一款具有快速、靈敏、特異性高等特點的支原體檢測試劑盒,可用于細胞、培養基、動物血清等的支原體檢測。本產品通過聚合酶鏈式反應技術(PCR)特異擴增支原體16s rRNA 基因保守區域片段,進行支原體檢測,能夠檢測包括M. arthritidis,M. hominis,M. hyorhinis,M. fermentans,M. orale,M. salivarium,M. bovis,M. bovigenitalium,M.pneumoniae,M. pirum等在內的數十種常見支原體。
儲存條件(Storage)
儲存于-15 ~ -25℃。
運輸方式(Shipping)
干冰運輸。
Note
For research use only .
使用方法(Standard Operating Procedure)icon
1. 收取待檢樣品。貼壁細胞:待細胞生長至80%左右即可,使用細胞刮刀刮取細胞(送檢細胞不能用消化液消化細胞);懸浮細胞:待細胞生長至80%左右即可直接進入下一步離心;
2. 1000rpm離心5min,棄上清,留100-200μl培養基重懸細胞,沸水浴10min;
3. 將煮沸的細胞懸浮液12000rpm離心3-5min;
4. 所得樣品取4μl直接用于PCR檢測,或凍存于-20℃備用;
注:一般以6孔板接種細胞,當細胞生長至80-90%時即可取樣進行檢測。培養液中的青霉素和鏈霉素不會影響檢測效果。
5. PCR檢測
5.1充分融化PCR反應液,按照下表配制PCR反應體系:
組分 |
陽性對照組 |
陰性對照組 |
實驗組 |
PCR反應液 |
14μl |
14μl |
14μl |
引物 |
2μl |
2μl |
2μl |
陽性對照 |
4μl |
- |
- |
待檢樣本 |
- |
- |
4μl |
ddH2O |
- |
4μl |
- |
5.2 將PCR反應管放入PCR儀,參照以下參數運行PCR反應程序:
程序 |
運行參數 |
循環數 |
|
預變性 |
94℃ 5min |
- |
|
循環 |
變性 |
94℃ 30s |
30 |
退火 |
55℃ 30s |
||
延伸 |
72℃ 15s |
||
延伸 |
72℃ 5min |
- |
5.3瓊脂糖凝膠電泳。
6. 凝膠成像觀察
注:支原體陽性細胞擴增片段約270bp。
M :marker
+ :陽性對照
- :陰性對照
1-3:檢測為陽性的細胞
4-5:檢測為陰性的細胞