搜索

159-2642-3062

服務熱線(工作日:9:00-17:30)

武漢科斯坦生物科技有限公司

熱搜詞:燕窩酸,不飽和脂肪酸,神經酰胺,花青素,黃酮,皂苷

Wuhan Chemstan Biotechnology Co., Ltd.

武漢科斯坦生物科技有限公司

代謝組學

分析測試

抗體/蛋白

地       址:武漢市東湖新技術開發區高新大道666號,武漢

                 國家生物產業基地B、C、D區研發樓C1棟
產品銷售:15926423062
技術服務:18971263062                                             
E - mail :
info@chemstan.com       
郵       編:430075

化合物單體

科斯坦生物(Chemstan)所有產品和服務僅用于科學研究,不為任何個人或者非科研性質的用途提供產品和服務。

Copyright @ 武漢科斯坦生物科技有限公司.All rights reserved

網站建設:中企動力武漢鄂ICP備19006850號-1

蛋白質組學

膠內蛋白質鑒定

瀏覽量
 ?。?)背景介紹
  在蛋白質組學技術出現之前,蛋白質鑒定是比較困難的?;谫|譜的蛋白質組學技術出現之后,蛋白質的鑒定才變得簡單、常規。SDS-PAGE電泳得到的條帶,如果想要鑒定蛋白,或者確認是否為目的蛋白,都可以通過質譜方法得以實現。此外,蛋白的翻譯后修飾位點(如磷酸化、乙?;?、泛素化等)也可以通過該方法進行檢測。
  蛋白樣品經過膠內酶解為肽段后,通過電噴霧進入質譜、碎裂后,掃描得到二級質譜圖,通過數據庫檢索就可以得到蛋白的鑒定信息和得分情況。
 
 ?。?)實驗流程
 
 
 ?。?)案例分析
  a.目的
  鑒定實驗組與對照組的差異蛋白條帶。實驗組與對照組相比,在高分子量區出現了一個明顯的差異蛋白條帶(見下圖),通過切取目的條帶、膠內酶解、質譜檢測的方法來鑒定該未知蛋白。
 
 
  b.步驟
  1)SDS-PAGE分離蛋白;
  2)切取目的條帶(方框所示);
  3)膠內酶解蛋白并抽提肽段;
  4)質譜檢測;
  5)數據庫搜索并鑒定蛋白。
 
  c.結果
  通過質譜分析,共鑒定到15個蛋白,排名前五的蛋白如下表所示。排名第一的蛋白匹配到57個肽段,遠遠大于其余蛋白,且PAGE膠中該蛋白的分子量也與理論值一致。因此,判斷該條帶的主蛋白是D05D44,其中一個肽段的二級質譜圖見下圖:
 
  質譜鑒定蛋白列表
 
#
Accession
Gene
MW.
Peptide #
1
Q05D44
Eif5b
137.6kD
57
2
P62889
Rpl30
12.7kD
6
3
Q6P542
Abcf1
94.9kD
5
4
Q61584
Fxr1
76.2kD
3
5
E9Q9T8
Mybpc3
141.3kD
1
 
  肽段的二級質譜圖
 
 
  參考文獻
  ● In-gel digestion for mass spectrometric characterization of proteins and proteomes. Nature Protocols 2006.
  ● A proteomic analysis of ataxia telangiectasia-mutated (ATM)/ATM-Rad3-related (ATR) substrates identifies the ubiquitin-proteasome system as a regulator for DNA damage checkpoints. The Journal of Biological Chemistry 2007.
下一篇:
女人18毛片a级毛片